体外以黑加仑油为基础的洗发水与以4%洗必泰为基础的洗发水对犬脓皮病分离菌株的抗菌活性:一项比较研究

在过去几年中，抗菌洗发水疗法越来越多地被用于治疗皮肤感染，以减少抗生素的全身使用体外黑加仑油洗发水(S1)对4%洗必泰洗发水(S2)对甲氧西林敏感的杀菌效果葡萄球菌pseudintermedius（MSSP），耐甲氧西林葡萄球菌pseudintermedius金黄色葡萄球菌（SA），大肠杆菌(EC)和假单胞菌绿脓杆菌（PA）分离物。

从患有浅表复发性脓皮病的狗的皮肤拭子中选择50种细菌菌株：10 MSSP、10 MRSP、10 SA、10 EC和10 PA。使用微量稀释板法对这两种洗发水进行了两次盲检，标量浓度为1:2至1:256。对每次稀释进行MBC。线性回归用于检测两种洗发水之间的统计显著性。

在1:2至1:16稀释两种防腐剂产品时，所有分离物均被完全杀死。在1:32稀释时，观察到第一批细菌生长，特别是S1和S2分别对2和4株MRSP。S1/S2的SA第一批致死稀释度为1:64，仅S2对SP。未观察到显著差异根据线性回归结果，两种洗发水之间的显著性为：i）MRSP、PA和EC(P< 0.05); ii）MSSP和SA(P< 0.1).

这项研究表明，黑醋栗油基洗发水和4%洗必泰洗发水具有相似的效果体外杀菌活性。

在过去的十年中，抗菌洗发水疗法越来越多地用于治疗皮肤感染[1,2]。这种新方法与兽医和人类药物中抗生素耐药性的增加有关。因此，需要新的策略和局部治疗来解决这个问题[1-5]。含有外用抗生素的乳膏或软膏，以及含有抗菌剂的洗发水(例如:洗必泰2%-4%、过氧化苯甲酰和乳酸乙酯[6])，可用于皮肤。国际指南建议使用局部抗菌洗发水和喷雾剂治疗轻度表面、表面和/或局部感染[7,8]。如果涉及到耐甲氧西林等多种抗生素的细菌，这种方法尤其重要葡萄球菌pseudintermedius（MRSP）和假单胞菌绿脓杆菌（PA），因为单独使用全身性抗生素很难控制这两种细菌[9,10]。事实上，这些细菌可能对所有口服抗生素都有耐药性，因此建议使用局部抗菌产品（包括防腐剂）治疗皮肤表面感染[11]。局部治疗的活性成分主要作用于感染部位，获得的抗菌浓度可能对耐药菌株更有效。在专题治疗中使用的防腐剂中，过氧化苯甲酰是一种有效的局部抗菌剂[12,13]，洗必泰对葡萄球菌有效，假单胞菌和马拉色菌[14,15]. 黑加仑子籽油是从黑加仑子的种子中提取出来的黑里贝斯最近，它作为多不饱和脂肪酸（PUFA）的来源在患有AD的人和狗身上引起了一些关注[16]。它含有异常高的欧米茄-3和-6、亚油酸和硬脂酸、类黄酮、酚酸和原花青素。由于这些原因，由于其生理性抗过敏、抗癌、抗高血压、抗关节炎和抗菌活性，应优先用于炎症性皮肤病的治疗[17]。

本研究旨在比较体外黑加仑油洗发水(S1)对4%洗必泰洗发水(S2)对甲氧西林敏感的杀菌效果普赛迪涅米修斯（MSSP），耐甲氧西林普赛迪涅米修斯（MRSP），金黄色葡萄球菌（SA），大肠杆菌(EC)和铜绿假单胞菌（PA）分离物。

细菌分离物和培养基

从不同犬种的浅表复发性脓皮病皮肤拭子中采集50株细菌，用10株MSSP、10株MRSP、10株SA、10株EC和10株PA代表。将拭子接种到含有5%羊血、甘露醇盐琼脂和McConkey琼脂（Oxoid）的胰蛋白胨大豆琼脂平板上^®，意大利），在最终读数之前，在37°C下培养24小时。根据表型鉴定标准，对纯分离株进行革兰氏染色、过氧化氢酶和氧化酶试验。采用API进行生化酶鉴定^®apiweb数据库画廊（bioMérieux）^®，法国），并具有可接受的值≥ 物种亲和力为85%。经系统鉴定为葡萄球菌中间部这里指的是普赛迪涅米修斯（SP）基于相关群体的最新分类[18]。

为了检查耐甲氧西林菌株，根据临床实验室和标准研究所[19]的指示，在选择性Brilliance MRSA2琼脂[20]（Oxoid）上进行Kirby-Bauer-苯唑西林扩散试验（奇数-5µg/mL）^®（意大利）。在50株细菌中，10株是MRSP，20株是MSSP和MSSA，20株细菌（EC和PA）是非MDR（多药耐药[21]）人群。

体外敏试验

本研究中使用的两种杀生物洗发水产品（S1和S2）及其活性成分如表1所示。使用微量稀释板法对两种洗发水进行了两次盲法试验[22,23]。细菌菌株在纯培养物中分离，并悬浮在磷酸盐缓冲液（PBS；pH 7.2）中通过密度计（DEN-1B，Biosan），浊度达到0.5 McFarland^®Sia，拉脱维亚），并对应于约10%的浓度^8.CFU/mL细菌。然后将细菌悬浮液进一步稀释1:100，以获得10%的最终浓度^6.在96孔无菌细胞培养皿中连续稀释，培养皿中含有100µl待测洗发水，标量浓度从1:2到1:256。然后在菌悬液中加入100µL不含防腐剂的PBS作为阳性对照(PC)，单独使用洗发水作为阴性对照(NC)。在+ 37°C孵育30分钟后，从每孔取10µl，用5%羊血涂在Tryptone Soya Agar上，最后再孵育24小时。因此，在平板上目测细菌菌落形成单位(CFU)的计数最高可达100，当菌落形成单位数量过多而无法单独计数时，定义为“融合”。最低杀菌浓度[24](MBC)定义为至少能抑制99.9%的初始菌群[25](平板上没有生长)的最低浓度，因此进行了评估。

统计分析

考虑到细菌菌落数量和洗发水稀释度，使用线性回归检测两种洗发水之间的统计显著性。

在所有情况下，在PC线中培养的微生物菌株都会导致融合生长。在仅含有洗发水的NC孔中未观察到生长。

如图1所示，产品显示出对所有受试病原体的杀菌活性。MBC因微生物种类的不同而有很大差异，但通常仅在属于同一物种的菌株之间通过两次四倍稀释而有所不同。所有分离物均在1:2至1:16稀释的防腐产品下被完全杀死（表2）。在1:32稀释时，观察到第一批细菌生长，特别是S1和S2分别对2株和4株MRSP。SA的第一批致死稀释度为S1/S2的1:64，仅S2针对SP。

检测到的CFU在不同的细菌种类中是同质的，根据所进行的稀释，可以确定1:256稀释度的渐进生长范围，并具有汇合外观（表2）。

两种洗发水之间没有显著差异。只有使用的稀释液对MRSP、PA和EC的细菌生长增殖有显著影响(P<0.05），MSSP和SA(P< 0.1).

黑加仑子油基洗发水具有活性体外对引起犬脓皮病的最常见皮肤细菌的功效。此外，本研究还表明，黑加仑油洗发水和4%洗必泰洗发水具有相似的功效体外杀菌活性。此前对类似配方的研究表明体外皮肤或耳科用产品的抗菌特性[22-26]。这些研究描述了已知的本地防腐剂的杀菌能力，如不同浓度的葡萄糖酸洗必泰、三乙二胺四乙酸、异丙醇、过氧化苯甲酰，通常与低pH值的消毒剂溶液或其他具有抗菌活性的成分有关。氯己定4% (S2)，对革兰氏阴性菌具有耐药作用金黄色葡萄球菌[27]，这里分别显示了1:32和1:64时的杀伤活性。后一种稀释（1:64）也适用于MSSP，而S1仅在1:64时对SA显示杀菌活性。在所有其他情况下，S1在1:32之前处于活动状态。否则，两种洗发水仅在相同稀释度下杀死的菌株数量不同（表2）。这项研究中测试的黑加仑油洗发水（S1）具有抗菌、抗炎、保护皮肤和舒缓皮肤的功效。然而，对引起犬浅表性脓皮病的最常见细菌的真正杀菌效果从未测试过体外直到现在。在过去的十年中，人们越来越关注使用具有抗菌活性的局部天然产品作为单一或辅助疗法，用于治疗狗的浅表细菌或真菌感染[4,28,29]。关于S1，可以断言，正如其他研究所揭示的，黑加仑子籽油显示出体外抗菌活性[30,31]。遗憾的是，无法评估哪种成分或哪种成分具有特定的抗菌活性。在S1分子中，焦核胺的抗菌作用，得益于其对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌的固有广谱抗菌活性[32]18β-甘草次酸、植物蛋白、生育酚和神经酰胺复合物对皮肤屏障具有润肤剂和保护作用。这些成分的抗菌活性从未被描述过。因此，作者假设，正是这些成分的组合表现出体外抗菌作用，在比起始产品高4倍的稀释度下，能够在接触后30分钟内确定细菌死亡。

这项研究证实了黑醋栗籽油洗发水如何被视为具有局部作用的防腐剂。此外，该产品具有抗菌性体外与洗必泰4%[23,30]对引起犬脓皮病的最常见细菌的活性相当。但是，需要进一步的研究来测试体内这种洗发水在控制浅表皮肤感染方面的功效。

作者感谢Carlo Maria Colombo博士和Giuliano Pappini博士的NBF部分财政支持，感谢Daniele Di Simone博士的统计支持（CNR临床生理学研究所），同时感谢都灵兽医诊所的实验室技术人员。

资金来源

这项研究得到了意大利NBF车道的部分支持。

利益冲突

作者之一是NBF lane顾问。

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