cyn d 1在巴西南部城市的空中过敏原

通过研究与暴露于室内和室外过敏原的因素，此类季节，气候变化和颗粒物，过敏症患者可以根据个人的暴露并进行预防治疗以及个性化的免疫疗法来筛选个人的灵敏度。分子过敏症已改善了对过敏反应的过敏性成分的有机生物学筛查，以实现过敏性暴露，敏化和症状的更具体结果[1,2]。酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种比色酶免疫测定技术，用于量化蛋白质，肽，抗体和激素等可溶性物质。由于其高灵敏度和特异性，ELISA可以在低浓度（例如过敏原）下定量物质[3]。

在巴西，花粉症（也称为花粉症或季节性过敏性鼻炎）主要归因于氯酸草[4]。在1970年代，该疾病的第一个病例报道出现在巴西南部地区，对花粉提取物和过敏性鼻炎和结膜炎的春季症状的人有敏感性[5]。当地的空气花粉计数揭示了春季9月至12月之间的草花粉，11月下半年达到顶峰[6]。在巴西南部的温带气候中，洛里姆多果（黑麦草）被发现是主要的过敏性敏感草。巴西南部的气候由冬季较低的温度组成，此前春季旺季的花粉季节之前。亚热带草种类cynodon dactylon（百慕大草）和paspalum notatum（巴伊亚草）由于它们的侵入性和普遍性而变得越来越突出[7]。此外，气候变化，全球变暖和空气污染逐渐促进过敏植物的强烈生长和分布，延长的授粉期以及花粉过敏性的增加[8,9]。

所有种类的瓜科中都存在1组草花粉过敏原。但是，1组过敏原在温带和亚热带气候草的亚家族之间具有有限的交叉反应性。CYN D 1是主要的过敏原C. dactylon，其次是CYN D4。PHLP 1和PHL P 5是主要的Poooideae花粉过敏原。鉴于脊柱质感之间的高过敏性同源性L.多重果，前者的过敏成分可以解释为对后者的敏化[10,11]。通过一系列免疫球蛋白E（IgE）微阵列分析，Araujo等。[12]在巴西南部库里蒂巴（Curitiba）患有哮喘和过敏性鼻炎儿童中对几种过敏原表现出敏感性；这些儿童中有16.8％对CYN D 1进行了敏感，而14.8％的儿童对PHL P 1和12.9％的敏感性对PHL P 4进行了敏感。17个儿童中有6名仅对CYN D 1和PHL P 4敏感，这表明真正的敏感C. dactylon。

这项研究是由百慕大草在亚热带和热带地区的广泛分布以及日益增长的致敏速率引起的。cynodon dactylon在巴西的某些地区。本研究是巴西的第一项研究，是为了确定巴西南部一个大城市玛丽林的空降Cyn d 1。为此，我们使用放置在室外的总颗粒撞击器，离地面90厘米的空气样品，流速为1,13 m³空气/小时。收集点是一个城市地区，位于纬度23.41 s，经度为51.97 W，海拔537 m。从2017年3月到2018年3月收集了样品。在12个月内收集了70个过滤器，中间间隔为5天（从1到14天到1天）。洗脱过滤器，小块（3厘米²）与F NH4HCO3，0.1％BSA（牛血清白蛋白）和0.1％Tween 20一起孵育^®（Polysorbate 20）在轨道振荡器中以4 oC的形式过夜。然后将溶液以4000 rpm离心5分钟，然后将上清液提取并储存为-80 oC。最后，分析样品中的CYN D 1（Alk-Abelló^®）通过ELISA，具有高度特异性和检测极限为0.24 ng/ml的方法[13]。该测试是用样品，对照和空白过滤器进行的，全部重复。

我们还在气象站的研究期间从玛格拉市收集了每日气象数据（OMM：83767，纬度23,4 s；经度为51,91 W；海上542 m）。温度，相对湿度，降雨沉淀，日照，风速和方向可用于分析。

从总的过滤器中，由于采样过程中的技术问题，将10个排除在分析之外。因此，我们分析了24小时内收集的28个过滤器，并在48小时内收集了32个过滤器。使用ELISA方法对60个样品进行了CYN D 1的测试。这些样品均未显示出任何可检测的水平。

直到今天，空气样品中用于CYN D 1的ELISA方法一直是一种前所未有的技术。为了确保ELISA中使用的材料正在起作用，并且采用的洗脱方法可靠地提取CYN D 1，我们进行了其他测定。我们测试了纯过敏提取物（免疫技术^®） 的cynodon dactylon和paspalum notatum分别为正面和负面对照。CYN D 1水平的50 ng/ml在cynodon dactylon提取物和2.28 ng/mlpaspalum notatum提炼。为了阐明洗脱法对Cyn d 1有效，稀释cynodon dactylon将提取物（1：1,000）应用于空白过滤器，干燥后，使用洗脱方案。CYN D 1的浓度范围为1.3至3.2 ng/ml，这证明了该方法的可靠性。

必须考虑任何样品中缺乏CYN D 1过敏原。仅使用cynodon dactylon过敏原进行分析引入了研究中的偏见，因为CYN D 4（也被认为是该物种的主要过敏原）没有被分析。要讨论的另一个方面是采样天数。一年内从该市的一个地点收集了60个样本。这些样品不能代表整整一年，在其他日子可能已经检测到过敏原。但是，如果我们认为在样本收集60天期间发现的气象数据相当于全年的假设，则不太可能p> 0.05，CI 95％，t- 学生测试）。因此，一个空气样品的一个地点足以捕获一个区域的花粉，因为它们可以行驶数百公里，而不论其来源的距离如何[14]。鉴于研究发现对cynodon dactylon在巴西人口[12,15]中，对cynodon dactylon在Maringá地区发现的与未发现的CYN D 1水平不一致。我们提出了两个假设来证明这些结果的合理性。第一个是即使存在低浓度的过敏原，也可能发生敏化。在另一个巴西南部城市Caxias Do Sul中进行的航空学研究中，全年都发现了花粉颗粒的存在[16]。最近，在库里蒂巴（Curitiba），从8月至4月观察到草花粉分散[9]。鉴于摩ri座和赤道的热带季节没有明确的季节，这种花粉分散的模式在亚热带和热带地区最为明显[17]。

该结果的第二个假设是，由于对第1组的交叉反应，对PHL P 1高阳性的个体中的cyn d 1血清特异性IgE抗体的存在可能在低水平上发生，而无需代表适当的敏感性。cynodon dactylon[18]。此外，该测试中使用的过敏元成分是氨基末端部分中天然过敏原（NCYN D 1）糖基化，这可能意味着在未暴露于未暴露于的种群中对NCYN D 1的特定IgE响应cynodon dactylon。NCYN D 1中存在的糖基化是为了产生IgE来产生交叉反应性碳水化合物决定因素（CCD），在几种植物物种和昆虫毒液中的表位，这些表位确定对临床上无关的抗原的敏感性[19]。

该研究的一些局限性是样品来自城市中的一个地点，仅反映了这一点。根据便利选择采样天数。由于无法暴露于大雨，因此自动排除了过多的雨天。特别是小时样品可能显示出由于抽样期长于平均水平而导致的蛋白质损失。考虑到该地区存在过敏性草，并且人们对这种类型的草敏感，因此应谨慎观察空气中可检测到的CYN D 1。

尽管本研究中的CYN D 1的水平不可检测到，但这是使用ELISA方法识别这一点的首次尝试cynodon dactylon环境中的过敏原。对过敏剂的实践至关重要，因为它使我们能够了解患者的环境暴露，识别风险，引入预防措施并制定个性化治疗方法，这对于过敏剂的实践至关重要。我们建议将这项研究与不同的成分复制，以突出他们所生活的环境中个体的过敏性暴露的多样性和程度。

作者要感谢Alk-Abelló实验室为CYN D 1测量提供的ELISA材料提供了全部。

作者要感谢Paraná联邦大学环境工程的Ricardo Godoi教授，后者为收集样品的影响者提供了影响。我们还要感谢Ernesto Taketomi教授和他的团队来自Uberlândia联邦大学过敏和临床免疫学实验室，他们为过滤器材料的分析做出了贡献。

作者贡献

CCT和JSM在数据收集，解释和分析以及编写方面做出了贡献；NARF在该手稿的数据，修订和内容的分析中做出了贡献。EAT和RHMG贡献了此手稿的批判性修订和内容。所有作者都阅读并同意了该手稿的已发布版本。

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